NY_T 2839-2015 致仔猪黄痢大肠杆菌分离鉴定技术
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ID： |
9F4A7736C9754D25AB0EA7D00043B297 |
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文件大小(MB)： |
0.76 |
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16 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-14 |
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ICS 11.220 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2839—2015,致仔猪黄痢大肠杆菌分离鉴定技术,Isolation and Identification of Escherichia coli Causing Piglet's,Yellow Dysentery,201570-09 发布2015-12-01 实施,中华人民共和国农业部 发布,ny/t 2839—2015,* * —1—,刖 s,本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草,本标准由中华人民共和国农业部提出,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归ロ,本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、扬州大学、青岛易邦生物工程有限公司,本标准主要起草人:陈义平、郭玉广、南文龙、高感、成大荣、杜元钊、高清清、马爽、程增青,I,ny/t 2839—2015,引 言,仔猪黄痢是由致病性大肠杆菌引起的以初生仔猪下痢为特征的传染病。该病主要引起7日龄以内,的仔猪发病，特征是排出黄色水样粪便以及渐进性死亡,病死率达30%以上,甚至全窝死亡,是影响仔,猪成活率的主要疾病之一。根据仔猪的发病日龄和临床症状可以初步做岀诊断,但是确诊则需要对致,病菌株进行分离鉴定。因此,进行致仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定,对仔猪黄痢的防治具有重要意义,本标准制定了致仔猪黄痢大肠杆菌的病料采集、病原菌分离及鉴定方法,n,NY/T 2839—2015,致仔猪黄痢大肠杆菌分离鉴定技术,1范围,本标准规定了致仔猪黄痢大肠杆菌分离鉴定的操作程序和判定标准,本标准适用于致仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是标注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本,文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB 4789. 38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数,GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法,GB 19489实验室生物安全通用要求,GB/T 27401实验室质量控制规范动物检疫,SN/T 0169-2010进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法,中华人民共和国农业部公告〔2003〕第302号 兽医实验室生物安全技术管理规范,3缩略语,下列缩略语适用于本文件:,V-P:乙酰甲基甲醇试验 Voges - Proskauer reaction,PCR:聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction,PBS:磷酸盐缓冲液 Phosphate buffer saline,SPF:无特定病原微生物 Specefic pathogen free,DMEM:培养基 Dulbecco's Modification of Eagle's Medium,PEG:聚乙二醇 Polyethyleneglycol,HAT:含黄嗯吟(hypoxantin)、氨基蝶吟(aminopterin)和胸腺嗜曉脫氧核昔(thymidin)的DMEM,HT:含黄噁吟(hypoxantin)和胸腺喀咤脱氧核昔(thymidin)的DMEM,dNTPs I脱氧核糖核甘三磷酸 deoxyribonucleoside triphosphates,bp :碱基对 base pair,TBE：Tris ー硼酸电泳缓冲液,r/min:转/ ズ钾 rotations per minute,min:分钟 minute,h：小时hour,4试剂,4. 1麦康凯、大豆陈琼脂、Minca、Slanetz等培养基:制备参见附录A,4.2 葡萄糖发酵、呵跺、甲基红、V-P、枸檬酸盐利用等生化试验管:制备参见附录B,4. 3兔抗K88、K99、987P、F41菌毛阳性血清及阴性对照兔血清:制备参见附录C,4.4 K88、K99、987P、F41菌毛特异性单克隆抗体及阴性对照鼠血清:制备参见附录D,5器材,超净工作台、恒温培养箱、酒精灯、接种环、手术刀、玻璃板或载玻片、微量移液器(10イハ20卩し,ny/t 2839—2015,200 mL,1 000 心）,6病料样品的处理,6. 1病料样品采集:仔猪黄痢多发于7日龄以内仔猪,发病仔猪不愿吃奶,拉黄痢,多呈黄色水样,内含,凝乳小片,后肢常被粪液。发病严重的仔猪很快消瘦,最后衰竭死亡。胃肠呈卡他性炎症,病变主要表,现为胃黏膜红肿,肠黏膜肿胀、充血或出血,肠系膜淋巴结肿大,采集疑似病例的肛拭子或肠道（十二指肠、空肠、回肠）作为细菌分离用病料,6.2病料样品的存放与运送:病料样品置2℃.条件下保存,并在3 d内进行细菌分离。如果超过,3 d,应置含10%甘油的0.01 mol/L pH7.4 PBS中,-15℃以下暂时保存,并尽快进行细菌分离。运输,时确保低温运送,并及时送达,以防样品腐败。按照中华人民共和国农业部公告〔2003〕第302号的规定,进行样品的生物安全标识,7致仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定方法,7.1细菌分离与纯化:将肠道病料置超净工作台中,固定,手术刀片火焰灼烧后,烙烫肠道浆膜层消毒,无菌打开肠腔,接种环灼烧消毒,冷却后伸入肠道,刮取病变部位肠道黏膜,划线接种于麦康凯培养基,或取肛拭子直接接种于麦康凯培养基。37℃培养!8 h.24 h,挑取疑似菌落（菌落呈鲜红色或粉红色,极少数呈无色,中等大小,1.0 mm.2. 5 mm,圆形,边缘整齐,表面光滑）,纯化后进行以下试验,7. 2生化特性鉴定：取纯化菌落分别接种葡萄糖发酵、呵噪、甲基红、V- P、枸椽酸盐利用生化试验管,参见附录B进行,观……
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